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基因重排与基因突变检测技术
点击:1677     添加时间:2018-06-08 19:38:32
 
 
基因重排检测技术
  恶性淋巴瘤的误诊率高,诊断难度大,是困扰临床的难题之一,我国淋巴瘤患者以B细胞淋巴瘤为主,目前其诊断主要依靠组织形态学和免疫组化,具有一定的局限性,因此,有必要需找一种更准确的检测方法和特异性指标来协助诊断。随着细胞遗传学和分子生物学的飞速发展,免疫球蛋白基因重排检测越来越多的被应用于临床,并取得了一定的成就。
    1.基因重排检测技术的目的
①检测淋巴组织增生性病变的克隆性起源,从而确定该病变性质。
②确定淋巴系统肿瘤疾病的分型。
③分析淋巴系统多发性肿瘤的起源同一性问题。
2.基因重排检测技术的原理
B淋巴细胞产生的抗原受体分子Ig和T淋巴细胞产生的抗原受体分子TCR,其编码基因在细胞的分化过程中均发生重排。通过基因重排,机体产生大量多样的重排构型,编码种类繁多的抗原特异性抗体。但对于一个个体及其后代,只含有其独特的重排构型,也就是说,一个T、B细胞或其克隆性后代,均只含一种独特的分子遗传学标记。目前已知淋巴细胞肿瘤源于单克隆性增生。用特定的引物对其基因进行扩增,当将扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶(或琼脂糖凝胶)电泳时,多克隆淋巴细胞将产生一片弥漫带(见于反应性增生),而单克隆性增殖的淋巴组织则出现一明显条带(见于恶性淋巴瘤)。因此通过检测淋巴组织增生性病变的重排构型可以鉴别淋巴系统的肿瘤性和反应性增生,并确定细胞的来源。
3.标本来源
常规中性福尔马林固定、石蜡包埋,8um切片5-10片,直接将切下的组织薄片直接放在无菌的1.5ml一次性离心管(EP管)中。
4.基因重排检测技术的操作流程
  1)石蜡包埋组织DNA的提取; 2)引物合成;3)PCR 扩增; 4)电泳及结果观察。
 
qPCR-HRM技术 -- 一种先进分子检测技术
  肿瘤靶向治疗的不断发展,对病理个体化诊断提出了更高的要求,而高灵敏度和简便易用的核酸分子检测技术则为个体化诊断提供可能,qPCR-HRM技术在个体化诊断中起着越来越重要的作用。
  1.什么是qPCR-HRM
  qPCR-HRM是指基于定量PCR的高分辨熔解曲线(qPCR-HRM)检测,其原理是根据DNA序列的长度、GC含量以及碱基互补性差异,应用高分辨率的熔解曲线对样品进行分析,其极高的温度均一性和温度分辨率使分辨精度可以达到单个碱基差异的区分。其样本可以是石蜡组织,也可以是病人的静脉血。
  2.qPCR-HRM在临床中的应用 
     近几年,由于qPCR-HRM技术具有检测时间短、操作简单、重复性好,较高灵敏性和闭管操作防污染等优势,在临床医学检测领域用于手术前、手术后个体化用药指导及血液肿瘤、实体瘤等方面分子诊断。目前,多家三级以上的医院病理科开展HRM检测,如非小细胞肺癌EGFR基因突变检测、结直肠癌K-ras基因突变检测、胃肠间质瘤C-kit基因检测。该检测可指导临床上选择性用药,扩大个体化用药的覆盖人群。一方面,可以有效提高医院和科室的诊疗水平,杜绝无效用药和过度治疗,减轻社会负担;另一方面,有效减少病人的不合理治疗导致的延误时机和巨大无效医药花费。 




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